Цвет бактерий, грамположительные и грамотрицательные бактерии

Окраска по Граму — Gram stain

Окрашивание по Граму или Окрашивание по Граму , также называемый метод Грама , представляет собой способ окрашивания используется для различения и классификации бактериальных видов на две большие группы ( грамположительных и грамотрицательных ). Название происходит от датского бактериолог Hans Christian Gram , который разработал технику.

Окрашивание по Граму различает бактерии от химических и физических свойств их клеточных стенок путем обнаружения пептидогликано , который присутствует в клеточной стенке грамположительных бактерий. Грамотрицательные клетки также содержат пептидогликана, но очень небольшой слой из него , который растворяется при добавлении спирта. Поэтому клетка теряет свой первоначальный цвет от основного пятна. Грамположительные бактерии сохраняют кристалл фиолетового красителя , и , таким образом окрашивается фиолетовые, в то время как грамотрицательные бактерии не делают; после того, как Промывка, контрастирующий добавляются (обычно сафранин или фуксин ) , которые будут окрашивать эти грамотрицательные бактерий розового цвета. Оба грамположительных бактерии и грамотрицательные бактерии подобрать контрастную. Контрастное, однако, является невидимым на грам-положительных бактерий , из — за более темного кристаллического фиолетового пятна.

Грам почти всегда первый шаг в предварительной идентификации бактериального организма. Хотя Грама является ценным диагностическим инструментом в клинических и научных исследованиях, не все бактерии могут быть окончательно классифицированы по этой методике. Это приводит к грам-переменные и грамотрицательных неопределенным групп.

содержание

  • 1 История
  • 2 Использование
    • 2,1 Медицинская
    • 2.2 Окрашивание механизм
  • 3 Примеры
    • 3,1 грам-положительных бактерий
    • 3.2 грам-отрицательных бактерий
    • 3.3 вариабельных и гры-неопределенные грамотрицательные бактерии
  • 4 Orthographic записка
  • 5 Смотри также
  • 6 Ссылки
  • 7 Внешние ссылки

история

Метод назван в честь его изобретателя, датский ученый Ганс Христиан Грам (1853-1938), который разработал технику, работая с Карлом Фридлендер в морг городской больницы в Берлине в 1884. Gram разработал свою технику не с целью отличить один тип бактерий от другого , но чтобы сделать бактерии более заметными в окрашенных участках легочной ткани. Он опубликовал свой метод в 1884 году, и включил в своем кратком отчете о наблюдении , что тиф бацилла не сохраняет окраску.

Пользы

Окрашивание по Граму является бактериологический лабораторный метод , используемый для дифференциации бактериальных видов на две большие группы ( грамположительных и грамотрицательных ) на основе физических свойств их клеточных стенок . Окрашивание по Граму не используется для классификации археи , ранее archaeabacteria, так как эти микроорганизмы дают весьма различные ответы , которые не следуют их филогенетических групп .

Грам не является непогрешимым инструментом для диагностики, идентификации, или филогенеза, и это крайне ограниченного применение в экологической микробиологии . Он используется в основном для предварительной идентификации морфологической или установить , что существует значительное количество бактерий в клинических образцах. Он не может идентифицировать бактерии на видовом уровне, и для большинства заболеваний, не следует использовать в качестве единственного метода идентификации бактерий. В клинических микробиологических лабораториях, он используется в сочетании с другими традиционными и молекулярными методами для идентификации бактерий. Некоторые организмы являются грам-переменной ( это означает , что они могут испачкать либо отрицательный или положительный); некоторые из них не окрашивали либо красителя в технике Грама и не видели. В современной экологической или молекулярной лаборатории микробиологии, большинство идентификации осуществляются с помощью генетических последовательностей и других молекулярных методов, которые являются более конкретными и информативным , чем дифференциальное окрашивание.

Грам был предложен , чтобы быть столь же эффективным диагностическим инструментом , как ПЦР в одном первичном исследовательском отчете о гонококковом уретрите.

медицинская

Граму проводят на теле жидкости или биопсии , когда инфекция подозревается. Граму дают результаты гораздо быстрее , чем культивирование , и особенно важно , когда инфекция будет сделать важное различие в лечении пациента и прогнозе; примеры являются спинномозговой жидкостью для менингита и синовиальной жидкости для септического артрита .

Окрашивание механизм

Грамположительные бактерии имеют толстую сетчатую клеточную стенку , изготовленную из пептидогликана (50-90% от клеточной оболочки), и в результате окрашивали фиолетовым с кристаллическим фиолетовым, тогда как грамотрицательные бактерии имеют более тонкий слой (10% клеток конверт), так что не сохраняет фиолетовую окраску и противопоказана окрашенный розовые от сафранина. Есть четыре основных шага по Граму:

  • Применение первичного пятна ( кристалл фиолетового ) к тепловой фиксированной мазке бактериальной культуры. Термофиксации убивают некоторые бактерии , но в основном используются для прикрепления бактерии к слайду , так что они не прополоскать во время процедуры окрашивания.
  • Добавление йодида , который связывается с кристаллическим фиолетовым и улавливает его в клетке
  • Быстрое обесцвечивание с этанолом или ацетоном
  • Контрастный с сафранином . ФУКОРЦИН иногда заменяет сафранинтак как он более интенсивно пятна анаэробных бактерий, но она меньшеобычно используетсякачестве контрастирующего.
Резюме Грама

применение реактив сотовый цвет
Грамположительный Грамотрицательный
Первичный краситель кристаллический фиолетовый пурпурный пурпурный
Ловушки агент йод пурпурный пурпурный
Decolorizer спирт / ацетон пурпурный бесцветный
Счетчик пятно Safranin / ФУКОРЦИН пурпурный розовый

Кристалл фиолетовый (CV) диссоциирует в водных растворах в CV +
и хлорид ( Cl —
) Ионы. Эти ионы проникают через клеточную стенку и клеточную мембрану как грамположительных , так и грамотрицательных клеток. CV +
ион взаимодействует с отрицательно заряженными компонентами бактериальных клеток и окрашивает клетки фиолетовыми.

Йодид ( I —
или я —
3 ) взаимодействует с CV +
и образует крупные комплексы кристаллического фиолетового и йода (CV-I) в пределах внутренних и внешних слоев клетки. Йод часто упоминаются как протрава , но является улавливание агента , который предотвращает удаление CV-я сложный и, следовательно, цвет клетки.

Читайте также:  Бронхит у взрослых симптомы, причины, лечение и профилактика заболевания

При добавлении decolorizer, таких как спирт или ацетон, он взаимодействует с липидами клеточной мембраны. Грамм-негативные клетки теряют свою внешнюю мембрану липополисахарида, а внутренний слой пептидогликан слева подвергаются. В CV-я комплексы отмывают от грамотрицательной клетки вместе с наружной мембраной. В противоположность этому, грамположительные клетка становится обезвоженной от обработки этанолом. Большой CV-I комплексов защемлен в грамположительных клетку из-за многослойный характер его пептидогликан. Шаг обесцвечивания имеет решающее значение и должен быть приурочен правильно; кристалл фиолетовый краситель удаляется из обоих грам-положительных и отрицательных клеток, если агент обесцвечивание остается слишком долго (считанные секунды).

После того, как обесцвечивание, граммы-положительные клетки остаются фиолетовыми и грамотрицательная клетка теряет свою фиолетовую окраску. Контрастное, который, как правило, положительно заряженные Safranin или основной фуксин, применяется последним, чтобы дать обесцвечивают грамотрицательных бактерий розовый или красный цвет.

Примеры

Грамположительные бактерии

Грамположительные бактерии обычно имеют одну мембрану ( monoderm ) , окруженный густой пептидогликана. Это правило следует два филы: Firmicutes (для классов , кроме молликут и Negativicutes и) Actinobacteria . В противоположность этому , члены Chloroflexi (зеленые без серы бактерии) являются monoderms , но обладают тонким или отсутствует (класс Dehalococcoidetes ) пептидогликана и может окрашивать отрицательным, положительным или неопределенными; Члены Deinococcus-Thermus группы пятна положительного , но являются diderms с толстым пептидогликаны.

Исторически сложилось так , что грамположительные формы составляли фила Firmicutes , имя в настоящее время используется для самой большой группы. Она включает в себя многие известные роды , такие как Bacillus , Listeria , Staphylococcus , Streptococcus , Enterococcus и Clostridium . Он также был расширен , чтобы включить молликуты , бактерии , такие как Mycoplasma , которые не имеют клеточных стенок и поэтому не может быть окрашивали по Граму, но полученные из таких форм.

Некоторые бактерии имеют клеточные стенки , которые особенно искусны в сохранении пятна. Они будут появляться положительное окрашивание по Граму , даже если они не являются тесно связаны с другими грам-положительных бактерий. Это так называемые кислотостойкими бактерии , и может быть дифференцировано только от других грамположительных бактерий с помощью специальных процедур окрашивания .

Грамотрицательные бактерии

Грамотрицательные бактерии , как правило , обладают тонким слоем пептидогликана между двумя мембранами ( diderms ). Большинство бактериальных фил являются грамотрицательные, в том числе цианобактерий , зеленых серных бактерий , и большинство протеобактерий (исключение составляют некоторые члены Rickettsiales и насекомых-эндосимбионтов в Enterobacteriales ).

Переменная грамположительных и грамотрицательных бактерий, неопределенными

Некоторые бактерии, после окрашивания Грама, выход гр-переменной шаблон: сочетание розовых и пурпурных клеток видны. В культурах Bacillus, Butyrivibrio и Clostridium, уменьшение толщины пептидогликана в процессе роста совпадает с увеличением числа клеток, которые Грам-отрицательным. Кроме того, во всех бактерий, окрашенных с помощью Грама, возраст культуры может повлиять на результатах окраски.

Грамотрицательные бактерии неопределенными действительно предсказуемо не реагируют на Граму и, следовательно, не может быть определена либо как грамположительные или грамотрицательные. Примеры включают в себя множество видов Mycobacterium , в том числе микобактерий туберкулеза и М. лепры .

Орфографический примечание

Термин «Окрашивание по Граму» происходит от фамилии Hans Christian Gram ; эпоним (Gram) поэтому капитализируются , но не нарицательным (пятно) , как это обычно для научных терминов. Прилагательные «грамположительных» и «грамотрицательные»; в одноименном прилагательных , их начальная буква может быть либо в нижнем регистре «г» или капитала «G», в зависимости от того, чей стиль руководство (если таковые имеются) определяет документ записываемого. Строчные стиль используется американскими Центрами по контролю и профилактике заболеваний и других схем типа , таких как стиль AMA . Словари могут использовать строчные буквы, заглавные буквы, или оба. ВерхнийРЕГИСТР «грамположительных» или «грамотрицательные» использование также распространено во многих научных журнальных статьях и публикациях. Когда статьи представлены в журналы, каждый журнал может или не может применять фирменный стиль для послепечатных версии. Препринт версия содержит какой бы стиль автора был использовать. Даже стиль схема , которые используют строчные буквы для прилагательных «грамм-положительная» и «грамотрицательные» по- прежнему использовать капитал для «Грама».

Грам окраска

Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Грамположительны кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет.

Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый.

Техника проведения окраски

Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.

Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Подготовка материала для окраски

Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. Гистологические срезы готовят по рутинной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.

Фиксация

При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.

Физический способ фиксации

Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.

Читайте также:  Фолиевая кислота 4-го поколения в составе средства Миофолик

Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °С).

Химический способ фиксации

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % — 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе.

Процесс окрашивания мазков

  1. На фиксированный мазок наливают один из осно́вных красителей на 2—3 минуты. Во избежание осадков окрашивают через фильтровальную бумагу.
  2. Сливают краску, аккуратно удаляют фильтровальную бумагу. Мазок заливают на 1—2 мин раствором Люголя или йодистым раствором по Граму (водный раствор йодида калия и кристаллического йода в соотношении 2:1) на 1—2 минуты до почернения препарата.
  3. Раствор сливают, мазок прополаскивают 96° этиловым спиртом или ацетоном, наливая и сливая его, пока и мазок не обесцветится и стекающая жидкость не станет чистой (приблизительно 20—40—60 секунд).
  4. Тщательно промывают стекла в проточной или дистиллированной воде 1—2 мин.
  5. Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают фуксином или сафранином (2—5 мин).
  6. Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту

  1. Депарафинированные срезы доводят до воды.
  2. Окрашивают 20 мин в 1% растворе парарозанилина или основного фуксина в 1 % уксусной кислоте (раствор красителя нагревают до кипения, охлаждают и фильтруют).
  3. Промывают в 3 сменах дистиллированной воды.
  4. Окрашивают 5 мин в 1% кристаллического фиолетового в дистиллированной воде.
  5. Быстро ополаскивают в 1% растворе хлорида натрия.
  6. Обрабатывают 30 с в смеси: 1 часть йода + 2 части йодида калия + 100 частей дистиллированной воды.
  7. Промокают фильтровальной бумагой.
  8. Дифференцируют, нанося на срез смесь равных объемов анилина и ксилола (1 — 2 мл); растворы сливают до тех пор, пока облачка красителя не перестанут отходить от среза.
  9. Проводят через 3 смены ксилола
  10. Заключают в бальзам или любую смолу, растворенную в ксилоле.

Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.

См. также

  • Крашение микробов

Ссылки

На немецком языке

  • Gram, HC (1884). «Über die isolierte Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten». Fortschritte der Medizin2: 185-89.

На английском языке

  • David H. Bergey Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. — 9th ed.. — Lippincott Williams & Wilkins, 1994. — ISBN ?1?
  • MT Madigan Brock Biology of Microorganisms. — 10th Edition. — Lippincott Williams & Wilkins, 2004. — ISBN ?2?
  • KJ Ryan Sherris Medical Microbiology. — 4th ed.. — McGraw Hill., 2004. — ISBN ?3?
  • Application of stains in clinical microbiology — резюме статьи в Biotechnic & Histochemistry, Volume 76, Number 3, May 01, 2001, pp. 119—125(7)

Wikimedia Foundation . 2010 .

  • Окраска по Романовскому-Гимзе
  • Окраска по Цилю-Нильсену

Смотреть что такое «Окраска по Граму» в других словарях:

окраска по Граму — Специальная система окраски бактерий, позволяющая дифференцировать строение бактериальной стенки [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN Gram stain … Справочник технического переводчика

Окраска микроорганизмов — (крашение микробов) комплекс методов и приёмов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в прикладной… … Википедия

окраска дифференциальная — специальные приемы окраски, позволяющие различать микроорганизмы сходной формы, размеров, но относящиеся к различным видам. Напр., окраска по Граму. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии

Окраска микроорганизмов — один из широко применяемых методов микробиологической техники (См. Микробиологическая техника), заключающийся в окраске фиксированных клеток микроорганизмов специальными красителями. Вначале в каплю воды, находящуюся на предметном или… … Большая советская энциклопедия

ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия

окраска бактерий по Граму — метод дифференциальной окраски клеток прокариот, разработанный датским микробиол. X. Громом в 1884 г. Заключается в последовательной обработке мазка клеток основными красителями (напр., кристаллическим фиолетовым) и иодом и последующем отмывании… … Словарь микробиологии

ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ — окраска микроорганизмов, метод бактериологического исследования, применяемый для обнаружения и изучения микробов при микроскопировании препаратов. Последние могут быть приготовлены из культур микробов или нативного материала — тканей органов … Ветеринарный энциклопедический словарь

Окрашивание по Граму — Метод Грама метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом. По Граму бактерии окрашивают основными… … Википедия

Грама окраска — см. окраска бактерий по Граму. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии

Крашение микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

ГРАМА МЕТОД

Грама метод (Н. Ch. J. Gram, датский врач, 1853—1938) — дифференциальная окраска бактерий; применяется для окраски бактерий в мазках из культур, экссудатов, тканей и пр. Метод предложен в 1884 г. и получил широкое распространение в бактериологии.

Сущность метода состоит в том, что при слабощелочной реакции бактерии окрашиваются основными красителями трифенилметановой группы (генцианвиолет, кристаллвиолет, метилвиолет). Обработка йодом или пикриновой к-той приводит к прочной фиксации красителя в определенных видах бактерий; последующее промывание окрашенного препарата нейтральным спиртом или ацетоном не обесцвечивает их (грамположительные бактерии). У других бактерий под влиянием йода не образуется прочного комплекса, и обработка спиртом или ацетоном приводит к обесцвечиванию. Эти бактерии (грамотрицательные) выявляются путем докрашивания контрастной краской. Грамположительность и грамотрицательность — важный диагностический признак в дифференциальной диагностике некоторых инфекционных заболеваний.

Читайте также:  Вернуть мужа если он не хочет общаться · GitHub

При окраске тканей по Грама методу клеточные структуры (за исключением хроматина делящихся ядер зернышек, базофильных клеток и рогового слоя эпидермиса) обесцвечиваются спиртом. Окраска по Граму вариабельна и зависит от многих факторов. Поэтому для получения точных и сравнимых результатов всегда следует придерживаться стандартной методики. Для фиксации препарата чаще используют высокую температуру, хотя могут быть применены и другие способы (см. Фиксация). Следует учитывать, что способ фиксирования влияет на ход окраски. Лучшими основными красителями для этого метода являются метилвиолет, генцианвиолет (см.) и др. Удовлетворительные результаты дают также основной фуксин, виктория синяя и др. В качестве протравы обычно применяют йод или пикриновую к-ту, но могут быть использованы бром, двухромовокислый калий, тринитрокрезол и др. Из обесцвечивающих агентов чаще применяют этиловый спирт и ацетон. Ацетон более активен в качестве средства, обесцвечивающего грамотрицательные бактерии. Используется также смесь из этих веществ.

Некоторые бактерии (Corynebacterium diphtheriae, Shigella dysenteriae, Bac. proteus) характеризуются грамнеустойчивостью, т. е. они находятся между безусловно грамположительными и безусловно грамотрицательными видами; отдельные клетки одного и того же вида также подвержены аналогичным колебаниям. Напр., в цепочке альфа-гемолитического стрептококка среди грамположительных кокков часто можно наблюдать грамотрицательную клетку. Особое влияние на окраску оказывает возраст культуры. Грампозитивность уменьшается с возрастом бактерии. Поэтому в старых культурах грамположительных видов обнаруживают большое количество грамотрицательных клеток. Мертвые и частично подвергшиеся аутолизу бактериальные клетки грамотрицательны. Результат окраски зависит от среды, в к-рой выращивается микроб. При оценке полученных данных, особенно в тех случаях, когда в грамотрицательных культурах обнаруживают грамположительные клетки, необходимо учитывать толщину мазка, влияющую на результат окраски. Желательно, чтобы толщина мазка была не больше толщины одной клетки, т. к. в толстом мазке, содержащем грамотрицательные микробы, часто наблюдаются грамположительные особи.

Техника окраски по Граму

Для окраски необходимо следующее: карболовый р-р красителя трифенилметановой группы (генцианвиолет, кристаллвиолет или метилвиолет); раствор Люголя (2 г йодистого калия, 1 г йода кристаллического, 300 мл дистиллированной воды) щелочной или нейтральной реакции; спирт 96% нейтральной реакции; р-р контрастной краски (фуксин Пфейффера, 1% водный р-р нейтральрота и др.).

Мазок, фиксированный жаром, окрашивают генцианвиолетом или другим красителем 1—2 мин., промывают водой и наливают на препарат р-р Люголя (на 1 мин.), после чего дифференцируют спиртом 7 г — 1 мин. до появления серо-фиолетовых струек краски. Затем препарат промывают водой и докрашивают одной из контрастных красок. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные бактерии, клетки и ткани — в красный. Предложены различные модификации метода Грама — А. И. Синева (применение генцианвиолетовой бумажки вместо карболового р-ра краски), Г. П. Калины, Хаккера (G. J. Hucker), Берк (V. Burke) и др.

Механизм окраски по Граму

Существует несколько теорий механизма окраски по Граму. Предполагалось, что грамположительная окраска обусловлена ненасыщенными жирными к-тами, имеющимися у некоторых бактерий и способными соединяться с йодом, в результате чего «эктоплазма» бактерий становится непроницаемой для спирта и извлечения адсорбированного красителя не происходит.

Другая теория [Стерн, Стерн (E. Stearn, A. Stearn), 1928] связывает механизм окраски по Граму с различиями в кислотно-основных свойствах протоплазмы у грамположительных и грамотрицательных бактерий. Эти две группы бактерий характеризуются различной изоэлектрической точкой (см.), к-рая у грамположительных видов находится при pH 2,0—3,0, а у грамотрицательных ок. 5. Наряду с этим следует указать, что протравы, применяемые при окраске (йод, пикриновая к-та, бихромат и др.), являются окислителями и имеют тенденцию превращать некоторые комплексы протоплазмы в более кислые соединения, сдвигая изоэлектрическую точку бактерий в кислую сторону. Свойство йода и других протрав сдвигать изоэлектрическую точку в кислую сторону у грамположительных бактерий выражено в большей степени, чем у грамотрицательных, что указывает на определенные хим. различия между этими микробами. Поскольку сродство к красителям и резистентность к обесцвечиванию тем сильнее, чем ниже Изоэлектрическая точка бактерий, а исходное значение pH у грамположительных бактерий ниже, чем у грамотрицательных, и после обработки йодом оно в значительной степени еще снижается, создаются условия для прочной фиксации краски.

Химическая теория [Хенри, Стейси (Н. Henry, М. Stacey), 1943] объясняет грамположительность наличием на поверхности цитоплазмы клетки комплекса из белка и рибонуклеата магния. Этот комплекс можно экстрагировать из тела грамположительных бактерий желчными солями и превратить их в грамотрицательные. Полученный таким способом грамотрицательный вариант можно вновь превратить в грамположительные добавив к нему выделенный экстракт. Превращение грамположительных бактерий в грамотрицательные происходит также при обработке убитых бактерий рибонуклеазой. Присутствие протеин-рибонуклеата магния на поверхности клетки доказывается тем, что успех окраски зависит от структурной целостности бактерий. При механических повреждениях, разрыве оболочки, раздавливании, растирании можно наблюдать превращение поврежденных бактерий в грамотрицательные. Грамположительность сохраняется у морфологически целостных клеток.

Имеются данные, свидетельствующие, что в конечном итоге окраска по Граму зависит от разной проницаемости клеточных стенок у грамположительных и грамотрицательных бактерий. В частности, указывается, что клеточная стенка грамположительных бактерий содержит больше пептидогликана, чем грамотрицательных бактерий, и, что особенно важно, пептидогликаны обеих групп бактерий структурно отличаются друг от друга. В пептидогликане грамположительных бактерий (Staphylococcus aureus) остатки N-ацетил мурамовой к-ты содержат О-ацетилгруппы в положении C6, что придает молекулам пептидогликана устойчивость, в частности к лизоциму. Высказывается предположение, что обработка спиртом при окраске по Граму уменьшает диаметр пор в пецтидогликановом слое у грамположительных бактерий в большей степени, чем у грамотрицательных.

В силу этого комплекс генцианвиолет — йод при обработке спиртом удерживаемся грамположительной клеткой и извлекается из грамотрицательной.

Ссылка на основную публикацию
Хронический антральный гастрит диагностика, симптомы, лечение, диета и народные средства
Хронический антральный гастрит Хронический антральный гастрит – воспалительный процесс в слизистой оболочке желудка, который локализуется в нижнем отделе органа, в...
Хлоропирамин инструкция по применению показания, противопоказания, побочное действие – описание Chlo
Уколы и таблетки 25 мг Хлоропирамин: инструкция по применению Антигистаминным лекарством, блокатором гистаминовых H1-рецепторов, является Хлоропирамин. Инструкция по применению сообщает,...
Хлорофиллипт Российские аналоги импортных лекарств с ценами
Хлорофиллипт для полоскания горла – инструкция, дешевые аналоги При боли в горле, эффективной процедурой считается полоскание горла, которое позволяет действовать...
Хронический атрофический гастрит симптомы и лечение Gastritoff
Причины, симптомы, лечение атрофического гастрита Атрофический гастрит – наиболее коварный тип хронического гастрита, является вероятной причиной предракового состояния желудка. Чаще...
Adblock detector